Imidazole Denature ፕሮቲን ያደርጋል

የማይንቀሳቀስ ሜታል አፊኒቲ ክሮማቶግራፊ (IMAC) በዓለም አቀፍ ደረጃ በሂሱ መለያ የተሰጡ ፕሮቲኖችን የማጥራት መስፈርት ሆኖ ይቆያል። ሆኖም ተመራማሪዎች በተለመደው የላብራቶሪ ሂደት ውስጥ ብዙ ጊዜ የሚያበሳጭ ችግር ያጋጥማቸዋል. ያልተጠበቁ የታችኛው ተፋሰስ ስብስብ, ድንገተኛ የኢንዛይም ተግባር ማጣት እና ያልተፈለገ ውስብስብ መለያየትን ይመለከታሉ. የእርስዎ ኤሌሽን ሪጀንት በጥንቃቄ የተገለጸውን ኢላማዎን በንቃት ያጠፋል ብለው ሊያስቡ ይችላሉ። እውነታው ከፍተኛ የሆነ ግንዛቤን ይፈልጋል። ኬሚካሉ imidazole እንደ ዩሪያ ወይም ጓኒዲን ያለ ክላሲካል ዲናቱራንት አይደለም። ሆኖም ግን, በተወሰኑ የሙከራ ሁኔታዎች ውስጥ ስስ የሆኑ የፕሮቲን አወቃቀሮችን በቀላሉ ያበላሻል. ያልተቋረጠ ከፍተኛ መጠን፣ የሙቀት ጭንቀት፣ ወይም ረዘም ላለ ጊዜ መጋለጥ ወሳኝ የፕሮቲን-ፕሮቲን ግንኙነቶችን በመደበኛነት ያበላሻል። ይህንን ጽሑፍ የነደፍነው ለእርስዎ ላብራቶሪ ግልጽ የሆነ በማስረጃ ላይ የተመሰረተ ማዕቀፍ ለማቅረብ ነው። በማቋቋሚያ ላይ የሚነሳውን መዋቅራዊ ጉዳት እንዴት በትክክል መለየት እንደሚችሉ ይማራሉ. የመንጻት ቋትዎን በትክክል እንዴት እንደሚያሻሽሉ እናሳይዎታለን። በመጨረሻም፣ ሚስጥራዊነት ያላቸው የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎችን ለመጠበቅ ደህንነቱ የተጠበቀ አማራጭ መድረኮችን እንገመግማለን።

ቁልፍ መቀበያዎች

• የማጎሪያ ገደቦች ፡ ደረጃውን የጠበቀ የኤሌክትሮላይዜሽን ክምችት (50-250 ሚሜ) በአጠቃላይ ደህንነታቸው የተጠበቀ ነው፣ ነገር ግን ከፍተኛ መጠን (~ 1M) በቻርጅ-መካከለኛ የፕሮቲን መስተጋብር የሚረብሽ ጠንካራ ጨው መሰል ተፅእኖዎችን ይፈጥራል።

• የሙቀት መበላሸት ስጋት፡- imidazole የያዙ የፕሮቲን ናሙናዎችን ለኤስዲኤስ-ገጽ ማፍላት የአሲድ-ላቢል ቦንድ ሃይድሮላይዜሽን ያስከትላል፣ ይህም ወደ ኢላማ መበላሸት ይመራዋል።

• የትንታኔ ጣልቃገብነት ፡ Imidazole በ 280 nm የ UV መብራትን አጥብቆ ይይዛል (ውሸት አዎንታዊ የምርት መረጃን ያስከትላል) እና በመዳብ ላይ የተመሰረቱ ሙከራዎችን (ሎውሪ ፣ ቢዩሬት) ጣልቃ ይገባል።

• የሂደት አማራጮች፡- ወደ ኮባልት ላይ የተመሰረቱ ሬንጅዎች መሸጋገር የሚፈለገውን የኢሚድዳዞል ትኩረትን ይቀንሳል፣ አዲሶቹ ሲሊካ/ላይሲን ማትሪክስ ግን ሙሉ በሙሉ ኢሚዳዞልን ያስወግዳሉ።

የኢሚዳዞል-የተፈጠረ የፕሮቲን አለመረጋጋት ዘዴዎች

የላቦራቶሪ ቡድኖች ብዙውን ጊዜ በተፈጥሮ ዒላማ አለመረጋጋት እና በጠባቂ-አመክንዮ ዲናትሬትሽን መካከል ያለውን ልዩነት ለመለየት ይቸገራሉ። ይህንን ልዩ ጉዳይ በተሳሳተ መንገድ መመርመር ወደ የተበላሸ መዋቅራዊ ባዮሎጂ መረጃ ይመራል። እንዲሁም ሰፊ፣ ጊዜ የሚወስድ የሙከራ ዳግም ሩጫ ያስፈልገዋል። ማቋቋሚያዎች በፕሮቲንዎ ላይ እንዴት እንደሚነኩ በትክክል መረዳት እነዚህን ዋና ዋና የአሰራር እንቅፋቶች ይከላከላል።

ያልተስተካከሉ የአክሲዮን መፍትሄዎች በውስጣዊ ከፍተኛ የአልካላይን ናቸው. የኤሌክትሮማግኔቲክ ማቋረጦችን በትክክል ማተም አለመቻል በአምድ መተግበሪያ ላይ ድንገተኛ እና ፈጣን የፒኤች መጠን መጨመርን ያስከትላል። ይህ ከባድ ለውጥ በሶስተኛ ደረጃ መዋቅር ውስጥ የተተረጎመ መገለጥን ያስነሳል። እንደዚህ ባሉ አስቸጋሪ አካባቢዎች ውስጥ ስስ የሆኑ የፕሮቲን ስብስቦች በፍጥነት ይለያሉ. በማንኛውም የማብራሪያ ደረጃ ከመቀጠልዎ በፊት ሁል ጊዜ የእርስዎን ቋት ፒኤች በጥንቃቄ ያረጋግጡ።

ከመጠን በላይ ማጎሪያ ለናሙና ታማኝነት ሌላ አደገኛ ድብቅ ስጋት ያስተዋውቃል። የሞላር ደረጃዎች ወደ 1M ሲቃረቡ፣ መፍትሄው ሙሉ በሙሉ እንደ ከፍተኛ-አዮኒክ-ጥንካሬ ሟሟ ነው። ይህ 'ከፍተኛ-ጨው' ተብሎ የሚጠራው ተፅእኖ ደካማ ኤሌክትሮስታቲክ ግንኙነቶችን በቀጥታ ይረብሸዋል። ተወላጅ የሆኑ ቅርጾችን ለመጠበቅ አስፈላጊ የሆኑ የዋልታ ቦንዶች ሙሉ በሙሉ ይፈርሳሉ። በፕሮቲን ሞለኪውሎች ዙሪያ ያለውን የእርጥበት ሽፋን ይለውጣል. ስለዚህ፣ ወሳኝ የፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብር (PPI) መልቲሜሪክ ውስብስቦችን አንድ ላይ ማያያዝ ተስኖታል።

በመጨረሻም፣ የተራዘመ ድህረ-ኤሉሽን ዘገምተኛ የተመጣጠነ ተንሳፋፊነትን ያበረታታል። የዒላማ ፕሮቲኖች በጊዜ ሂደት መፍትሄ ሊያገኙ ይችላሉ. በሚቀጥሉት ዲያሊሲስ ወይም የረጅም ጊዜ የማከማቻ ደረጃዎች ላይ ከባድ ድምር ሲከሰት ሊያስተውሉ ይችላሉ። የተለቀቁ ክፍልፋዮችዎን ማቀናበር ወዲያውኑ ይህንን አደገኛ የመጋለጥ መስኮት ይገድባል። ፈጣን ማራገፍ ፕሮቲኖችዎ የታሰቡትን ተግባራዊ ቤተኛ ሁኔታ እንደያዙ ያረጋግጣል።

የኢሚድአዞል መቋረጥን የሚቀሰቅሱ 3 የተለመዱ የፕሮቶኮል ስህተቶች

የፕሮቶኮል ልዩነቶች ብዙውን ጊዜ ፍጹም በሆነ ሁኔታ የተከናወኑ ንጽህናዎችን ያበላሻሉ። ያልተፈለገ ጥርስ ማስወጣትን የሚቀሰቅሱ ሶስት ዋና ዋና የአሰራር ስህተቶችን ለይተናል። እነዚህን ስህተቶች ማስወገድ የሙከራ ወጥነትዎን በእጅጉ ያሻሽላል።

1. ስህተት 1፡ ለSDS-ገጽ የማፍላት ናሙናዎች።
   አደጋው ፡ ተመራማሪዎች ጂልስ ከመሮጥ በፊት ናሙናዎችን በ100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ያበስላሉ። ከፍተኛ የኤሌክትሮማግኔቲክ ውህዶችን የያዙ በቀጥታ የሚፈላ ናሙናዎች ጥቃቅን የአሲድ-ላቢል ቦንዶችን ይቆርጣሉ። ከፍተኛ reagent ደረጃዎች ይህን አጥፊ hydrolysis በአስገራሚ ያፋጥናል. የሚታየውን የባንድ መበላሸት እና በውጤቱ ጄል ላይ ሲቀባ ማየት አይቀሬ ነው።
   ማስተካከያው ፡ ናሙናዎችዎን በትክክል ለ 5 ደቂቃዎች በ 70 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ያሳድጉ. ይህ ለስላሳ የማሞቅ ዘዴ ኬሚካላዊ ጥፋት ሳያስከትል ፕሮቲኖችን ለኤሌክትሮፊዮሬሲስ በደህና ያስወግዳል። ትክክለኛ ምርትዎን የሚወክሉ ግልጽ እና ትክክለኛ ባንዶችን አሳክተዋል።

2. ስህተት 2፡ የንጽሕና ጉዳዮችን ለማስተካከል በImidazole Concentration ላይ መተማመን።
   አደጋው ፡ ኦፕሬተሮች አንዳንዴ ከ 500 ሚ.ሜ በላይ የኤሌክትሮማግኔቲክ መከላከያዎችን ሳያስፈልግ ይገፋሉ። ትስስርን ከማመቻቸት ይልቅ ግትር ኢላማዎችን ከአምዱ ላይ ለማስወጣት ይሞክራሉ። ይህ ከባድ እጅ ያለው አካሄድ የብረት ionዎችን ከሜታሎፕሮቲኖች በማረጋጋት የማይሰሩ አፖፕሮቲኖችን ይፈጥራል። እንዲሁም ለማንኛውም የታችኛው የ In-Vivo ሙከራዎች ሴሉላር መርዛማነት ስጋቶችን ይጨምራል።
   ማስተካከያው ፡ የኤሌክትሮኒካዊ ጥንካሬን ከመጨመር ይልቅ የመጀመሪያ ደረጃ ማጠቢያ ደረጃዎችን ያሻሽሉ. የአምድ መጠን (CV) ከትክክለኛው የፕሮቲን ጭነት ጋር በማዛመድ የተለየ ያልሆነ ማሰሪያን ያስተካክሉ። 200-500 ሚሜ አርጊኒን መጨመር እጅግ በጣም ጥሩ ኤሌክትሮስታቲክ የቆሻሻ መጣያዎችን ያቀርባል. በአማራጭ፣ በ1-4 ሚሜ ኤቲፒ መታጠብ በጋራ የተጣራ ሞለኪውላር ቻፔሮን ከዒላማዎ ላይ በተሳካ ሁኔታ ይለቀቃል።

3. ስህተት 3፡ ሂስቲዲን ፕሮቶኔሽን ግዛቶችን ችላ ማለት።
   አደጋው ፡ Buffer pH የአካላዊ ትስስር መካኒኮችን ሙሉ በሙሉ ይቆጣጠራል። በሚታሰርበት ወይም በሚታጠብበት ጊዜ ፒኤች በጣም ዝቅተኛ መጣል ወሳኝ የሆነውን የሂስቲዲን ፕሮቶኔሽን ይከላከላል። ወደ isoelectric ነጥብ መቃረብ ያለጊዜው ዒላማ elution ይመራል. ፕሮቲኖች በጣም ዝቅተኛ በሆነ መጠን፣ አንዳንዴም በ10 ሚሜ ብቻ ከሬዚኑ ሊወድቁ ይችላሉ። ይህ ኦፕሬተሮች ምርታቸውን ለማግኘት ሲሉ መደበኛ ፕሮቶኮሎችን በአደገኛ ሁኔታ እንዲቀይሩ ያስገድዳቸዋል። ትክክለኛውን የኃይል መሙያ ሁኔታ ለማስቀጠል የእርስዎ ቋት ፒኤች ከ 7.5 በላይ ወይም ከዚያ በላይ መቆየቱን ማረጋገጥ አለብዎት።

የታችኛው ተፅዕኖ፡ የኢሚድዞል ፕሮቲን እንዴት እንደሚገመግም

የተቀሩት ቋት ክፍሎች እንዴት ወደ ታች የተፋሰሱ የትንታኔ ግምገማዎችን እንደሚያዛባ መገምገም አለቦት። የተሳሳቱ መለኪያዎች ቀጣይ የሙከራ ደረጃዎችን ያበላሻሉ እና ጠቃሚ የላብራቶሪ ሀብቶችን ያባክናሉ።

የግምገማ ልኬት፡ የቁጥር ትክክለኛነት

ሬጀንቱ እጅግ በጣም ጠንካራ የሆነ የ UV መሳብ ባህሪያትን ያሳያል። የተለመደው 250 ሚሜ ኤሌሽን ቋት ከ0.2 እስከ 0.4 የሚደርስ ዳራ $A_{280}$ ይፈጥራል። ይህ አካላዊ ክስተት የሰው ሰራሽ በሆነ መንገድ የታለመውን ምርት ስሌቶች በከፍተኛ ሁኔታ ይጨምራል። በቱቦው ውስጥ ካለው የበለጠ ብዙ ፕሮቲን እንዳመረተ ያስቡ ይሆናል።

የማስተካከያ ስልት ፡ ሁልጊዜ የእርስዎን ስፔክትሮፎቶሜትር በጥንቃቄ ባዶ ያድርጉት። የማመሳከሪያ ባዶ ሆኖ ትክክለኛውን የኤሌሜሽን ቋት ቅንብር መጠቀም አለቦት። በአማራጭ፣ የስራ ፍሰትዎን ወደ ብራድፎርድ መመዘኛ ያስተላልፉ። ይህ በኮማሴ ላይ የተመሰረተ አስተማማኝ ዘዴ እንዲህ ያለውን ልዩ የጨረር ጣልቃገብነት በከፍተኛ ሁኔታ ይቋቋማል። እንደ Lowry እና Biuret assays ያሉ ​​የመዳብ ቅነሳ ዘዴዎችን ሙሉ በሙሉ ማስወገድ አለብዎት። ኬሚካሉ በተፈጥሮው የመዳብ ionዎችን ይቀንሳል, ግዙፍ የቁጥር ውድቀቶችን ያስከትላል.

የግምገማ ልኬት፡ መዋቅራዊ እና ተግባራዊ ሙከራዎች

ቀሪዎቹ ሞለኪውሎች ውስብስብ በሆነው ሜታልሎኤንዛይም ውስጥ ለሚገኙ የብረት ማሰሪያ ቦታዎች በከፍተኛ ሁኔታ ይወዳደራሉ። በተጨማሪም፣ ስሱ ሕዋሳትን መሰረት ባደረጉ ወይም ውስጠ-ህይወታዊ ባዮሎጂካዊ ሙከራዎች ውስጥ እንደ ኃይለኛ የኢንዶሮኒክ መስተጓጎል ሊሆኑ ይችላሉ። በናሙናዎ ውስጥ እንዲዘዋወሩ መተው ፊዚዮሎጂያዊ አግባብነት እና መዋቅራዊ መረጃ ታማኝነትን አደጋ ላይ ይጥላል።

የማስወገጃ ፕሮቶኮሎች ፡ የታችኛው ተፋሰስ ባዮሎጂያዊ አዋጭነት ሲገመገም፣ ወዲያውኑ የተረፈውን እንዲወገድ ያዛል። ለፈጣን የመመለሻ ጊዜዎች ፈጣን መጠነ-ማግለያ ጠራጊ አምዶችን ይጠቀሙ። ሴንትሪፉጋል አልትራፊልትሬሽን እና የአንድ ሌሊት እጥበት (ዲያሊሲስ) የኢንዛይም ምርመራ ከመደረጉ በፊት ለጥልቅ ናሙና ማጽዳት በልዩ ሁኔታ ይሰራሉ።

የመመርመሪያ ዓይነት	የጣልቃ ገብነት ደረጃ	የጣልቃ ገብነት ዘዴ	ምክር
A280 (UV Absorbance)	ከፍተኛ	በ 280 nm ውስጥ ጠንካራ ውስጣዊ መምጠጥ	በጥንቃቄ ባዶ ያድርጉ ወይም ያስወግዱ
ብራድፎርድ (ኮማሴ)	ዝቅተኛ	ከቀለም ማሰር ጋር አነስተኛ መስተጋብር	በጣም የሚመከር
Lowry / Biuret	ከባድ	መዳብን ይቀንሳል, የቀለም ለውጥ ይከላከላል	አይጠቀሙ

የሂደት ማመቻቸት፡ ምርትን ሳይቆጥብ የኢሚድአዞል ተጋላጭነትን መቀነስ

ተጋላጭነትን መቀነስ የመጨረሻውን የተግባር ምርትን በብቃት ይከላከላል። በርካታ በጣም የታለሙ፣ የተረጋገጡ ስልቶችን በመጠቀም የላብራቶሪ ሂደቶችን ማመቻቸት ይችላሉ።

የመፍትሄው ምድብ 1፡ ወደ ኮባልት-ተኮር IMAC ሲስተምስ መቀየር

የኮባልት ሙጫዎች ከመደበኛ የኒ-ኤንቲኤ ማትሪክስ ጋር ሲነፃፀሩ በጣም የላቀ የዒላማ ልዩነት ያሳያሉ። ለዳራ አስተናጋጅ ፕሮቲኖች በተፈጥሮ ዝቅተኛ የግንኙነት ገደቦች አሏቸው። ይህ የተለየ ኬሚካላዊ እውነታ በከፍተኛ ደረጃ ዝቅተኛ የሬጀንት ክምችት ላይ ከፍተኛ ንፁህ መለቀቅን ያስችላል። የሚፈለገውን ኢላማ ሙሉ ለሙሉ ለመልቀቅ በተለምዶ 150 ሚሜ አካባቢ ብቻ ያስፈልግዎታል። ይህ ጉልህ የሆነ ቅነሳ በጥቃቅን የኢንዛይም አወቃቀሮች ላይ የሚፈጠረውን አጠቃላይ ጭንቀት ይቀንሳል።

የመፍትሔው ምድብ 2፡ የመንጻት እውነታዎችን መካድ

አንዳንድ በጣም የተገለጹ ፕሮቲኖች በአገር ውስጥ የማይሟሟ የመካተት አካላት ይመሰርታሉ። እነሱን በብቃት ማቀናበር እጅግ በጣም ከባድ የማቋረጫ ሁኔታዎችን ይጠይቃል። እነዚህን ውህዶች ለማሟሟት 6M Guanidine-HCl ወይም 8M Urea መጠቀም በጣም አስፈላጊ ይሆናል።

ወሳኝ የአተገባበር ማስታወሻ ፡ ዋናው ኤሊዩሽን ሞለኪውል በእነዚህ ውስብስብ ሁኔታዎች ውስጥ እንደ ዲናታራንት ማጽጃ አይሰራም። ከባድ ዲናቱራተሮች በመሠረታዊነት አጠቃላይ የአካላዊ ትስስር መገለጫን ይለውጣሉ። በማጽዳት ጊዜ ጉዋኒዲንን ከተጠቀሙ፣ SDS-PAGEን ከማሄድዎ በፊት ናሙናውን ወደ ዩሪያ መጥራት አለብዎት። ይህ የግዴታ እርምጃ ከመደበኛ የመጫኛ ቋቶች ጋር ሲደባለቅ አስከፊ የሆነ ክሪስታላይዜሽን ይከላከላል።

የመፍትሄው ምድብ 3፡ ቋት ማረጋጊያዎች

የተወሰኑ የብዝሃ-ንዑስ ውስብስቦች ለድንገተኛ መለያየት በጣም የተጋለጡ ናቸው። ወሳኝ በሆነው የማብራሪያ ደረጃ ወቅት የሚረብሹ ኃይሎችን ለመከላከል በጋራ የመንጻት ቋቶችን በመደበኛነት ማሟላት አለብዎት። እንደ PEG ወይም glycerol ያሉ ion-ያልሆኑ ማረጋጊያዎችን ማከል አስፈላጊ መዋቅራዊ ድጋፍ ይሰጣል። እነዚህ ተጨማሪዎች የሃይድሮፎቢክ ፕላስተሮችን ይከላከላሉ እና በሩጫው ጊዜ ሁሉ ዓለም አቀፋዊ ተመጣጣኝነት ይጠብቃሉ።

ስልት	የመጀመሪያ ደረጃ ጥቅም	ምርጥ የአጠቃቀም መያዣ
የኮባልት ሙጫዎች	የማጣራት ደረጃን ይቀንሳል (~ 150 ሚሜ)	ለመደመር የተጋለጡ ስሜታዊ ኢላማዎች
ዩሪያ / ጉዋኒዲን መጨመር	የማካተት አካላትን ይሟሟል	የማይሟሟ የፕሮቲን መግለጫ
PEG / Glycerol Buffering	ውስብስብ መለያየትን ይከላከላል	ባለብዙ-ንዑስ ፕሮቲን ውህዶች

Imidazole-ነጻ የመንጻት አማራጮችን መገምገም

የንግድ ችግር

የአጠቃላይ የላቦራቶሪ ደህንነትን በተመለከተ የቁጥጥር ቁጥጥር በመላው አለም እየጨመረ ቀጥሏል። ባህላዊ ኬሚካላዊ ሪኤጀንቶች በሰነድ የተደገፈ የመራቢያ መርዛማነት እና የኢንዶሮኒክ መቋረጥ አደጋዎችን ይይዛሉ። በተጨማሪም በሄቪ ብረታ ብረቶች ምክንያት ለታችኛው ተፋሰስ ውድቀት ከፍተኛ ወጪ ከፍተኛ የአሠራር ፈተናዎችን ይፈጥራል። ኒኬል ኦክሳይድ በኋለኞቹ የእድገት ደረጃዎች ውስጥ ስሱ የሕክምና ፕሮቲን እጩዎችን በተደጋጋሚ ያጠፋል. ፋሲሊቲዎች ሁለቱንም ሰራተኞች እና ጠቃሚ ሙከራዎችን ለመጠበቅ ደህንነቱ የተጠበቀ የስራ ፍሰቶችን ይፈልጋሉ።

የመፍትሄው ምድብ: ቀጣይ-ትውልድ ሲሊካ እና ሊሲን ሬንጅ

የግምገማ መስፈርቶች ፡ ጊዜ ያለፈባቸውን የኒ-ኤንቲኤ ማትሪክስ መተካት ብዙ መርዛማ አደጋዎችን በአንድ ጊዜ ያስወግዳል። የሚቀጥለው ትውልድ ሲሊካ ላይ የተመሰረቱ ማትሪክስ ልዩ ልዩ የላይሲን መካከለኛ የመንጻት መካኒኮችን ይጠቀማሉ። ይህ ዘመናዊ ሽግግር በረጅም ጊዜ ማከማቻ ጊዜ እንደ ኢታኖል ያሉ ተቀጣጣይ ሬጀንቶችን ጥብቅ ፍላጎት ያስወግዳል። በግልጽ የሚታይ ደህንነቱ የተጠበቀ፣ የበለጠ ታዛዥ የሆነ የላብራቶሪ አካባቢን በቅጽበት ያገኙታል።

ባህሪያት-ወደ-ውጤቶች ፡ ላይሲን ከዒላማዎች ጋር በመለስተኛ ሃይድሮጂን ትስስር እና ረጋ ያለ ኤሌክትሮስታቲክ መስተጋብር ይገናኛል። ወደር የሌለው እጅግ በጣም ጥሩ ባዮኬሚካላዊነትን ያቀርባል. ዒላማዎች በኃይለኛ የመፈናቀል ወኪሎች ላይ ሳይመሰረቱ በንጽህና እንዲሞቁ ያስችላቸዋል። ከተለምዷዊ የመፈናቀል ዘዴዎች ጋር ተያይዘው የሚመጡትን የመዋቅር መጥፋት አደጋዎችን ሙሉ በሙሉ ያስወግዳሉ። ጊዜ የሚወስድ፣ አሰልቺ የሆነ የማስወገድ ሂደቶች ሙሉ በሙሉ ጊዜ ያለፈባቸው ይሆናሉ።

የእጩዎች ዝርዝር አመክንዮ

ውስብስብ መዋቅራዊ ባዮሎጂ ወይም ቴራፒዩቲካል ፕሮቲን ግምገማ ቅድሚያ የሚሰጡ ፋሲሊቲዎች ልዩ ጥብቅ የሆኑ የሙከራ ፍላጎቶች ያጋጥሟቸዋል። ጥብቅ የአካባቢ ጤና እና ደህንነት (EHS) ተገዢነት ለተቋማዊ ማፅደቂያዎች ዋነኛው ነው። ቡድኖች ወደ ሙሉ ለሙሉ አማራጭ የባለቤትነት መለያዎች የመንቀሳቀስን ROI በትክክል ማስላት አለባቸው። ባህላዊ የIMAC ጽዳት እርምጃዎችን መደበኛ ማድረግ ከፍተኛ ጉልበት የሚጠይቅ እና ብዙ መጠን ያለው ቋት ይበላል። ማስወገድ imidazole በአጠቃላይ አጠቃላይ የምርት ቧንቧ መስመርን ያስተካክላል. በጣም ሚስጥራዊነት ላላቸው የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ከፍተኛውን አዋጭነት ያረጋግጣል።

ማጠቃለያ

በመጠባበቂያ-የተፈጠረ የፕሮቲን አለመረጋጋት ላይ ያሉ ጥቃቅን ኬሚካላዊ እውነታዎችን በሰፊው ሸፍነናል። እንደ ሁለንተናዊ ዲናቱራንት ባይሰራም፣ ተገቢ ያልሆነ አጠቃቀም የፕሮቲን ንፁህነትን ያበላሻል። ከመጠን በላይ መሥራት ፣ ተገቢ ያልሆነ የናሙና ማሞቂያ ፣ ወይም አጠቃላይ የትንታኔ ቸልተኝነት ውድ የሆኑ የሙከራ መረጃዎችን ያበላሻል።

ለእርስዎ ላቦራቶሪ እነዚህን አጭር፣ በድርጊት ላይ ያተኮሩ ቀጣይ እርምጃዎችን ያስቡባቸው፡-

• ለማይፈለጋቸው ከፍተኛ የማጎሪያ የማብራሪያ ደረጃዎች አሁን ያሉዎትን የመንጻት ፕሮቶኮሎች ወዲያውኑ ኦዲት ያድርጉ።

• ከጄል ኤሌክትሮፊዮራይዝስ በፊት መደበኛ የማፍላት ዘዴዎችን በቀስታ በ 70 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ማሞቂያ ይተኩ.

• ሁሉንም የታችኛው የኦፕቲካል ብዛት የስራ ፍሰቶችን ወደ ብራድፎርድ መመዘኛዎች ቀይር።

• በጣም ሚስጥራዊነት ላላቸው የታችኛው ተፋሰስ አፕሊኬሽኖች ሙሉ በሙሉ ነፃ ወይም ዝቅተኛ ትኩረት የማትሪክስ መድረኮችን ይገምግሙ።

የሚጠየቁ ጥያቄዎች

ጥ፡- ኢሚዳዞል ማፍላት ፕሮቲኖችን ያበላሻል?

መ: አዎ. ለኤስዲኤስ-ገጽ ወደ 100 ዲግሪ ሴንቲግሬድ (100 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ) ያላቸው ኢሚድዞል የያዙ ቋጥኞችን ማሞቅ የአሲድ-ላቢል ቦንዶችን ሃይድሮላይዝ ያደርጋል። በ 70 ዲግሪ ሴንቲግሬድ ውስጥ ለ 5 ደቂቃዎች ማሞቅ የሚመከር አስተማማኝ አማራጭ ነው.

ጥ: imidazole የ A280 ፕሮቲን መጠንን እንዴት ይነካል?

መ: ኢሚዳዶል በ 280 nm ላይ አጥብቆ ይይዛል. የተለመደው የኤሌክትሮማግኔቲክ ውህዶች (ለምሳሌ 250 ሚሜ) ሰው ሰራሽ ዳራ ከ 0.2 እስከ 0.4 ሊያስገባ ይችላል፣ ይህም የውሸት ከፍተኛ ንባቦችን ያስከትላል።

ጥ: ለፕሮቲን ንፅህና ከፍተኛው የኢሚድዶልዝ አስተማማኝ ትኩረት ምንድነው?

መ: መደበኛ ኤልዩሽን ከ50-250 ሚ.ሜ ሲጠቀም፣ ወደ 1M የሚጠጉ ማጎሪያዎች እንደ ከፍተኛ ጨው ይሠራሉ እና የፕሮቲን-ፕሮቲን መስተጋብርን ሊያበላሹ እና ውህደትን ሊያስከትሉ ይችላሉ።

ጥ: ፕሮቲኖችን ከማጠራቀምዎ በፊት imidazole መወገድ አለበት?

መ: ለረጅም ጊዜ መረጋጋት፣ ኢንዛይማቲክ ትንታኔዎች ወይም በ Vivo ጥናቶች ውስጥ ኢሚድዞሌል አምዶችን በማጽዳት ወይም በዲያሊሲስ መወገድ አለበት ፣ ምክንያቱም ረዘም ላለ ጊዜ ተጋላጭነት ወደ ዝናብ እና መዋቅራዊ መንሸራተት ያስከትላል።