Imidazole ከኒኬል ጋር እንዴት እንደሚገናኝ

ወጥነት የሌለው ፕሮቲን የማጥራት ውጤት ብዙ ልምድ ያላቸውን የላብራቶሪ አስተዳዳሪዎች እንኳን ያበሳጫል። ብዙ የታችኛው ተፋሰስ ማቀነባበሪያ መሐንዲሶች በየቀኑ ደካማ ንፅህና ወይም ያልተጠበቀ ዒላማ ኪሳራ ያጋጥማቸዋል። ብዙውን ጊዜ የተወሰኑ የማስተባበር ኬሚስትሪን ለማዛመድ የቋት ውህዶችን ከማስተካከል ይልቅ በአጠቃላይ ፕሮቶኮሎች ላይ ይተማመናሉ። የማይንቀሳቀስ ሜታል አፊኒቲ ክሮሞግራፊ (IMAC) ፍፁም ትክክለኛነትን ይጠይቃል። የዒላማዎ ሞለኪውል ልዩ አስገዳጅ ተለዋዋጭ ሁኔታዎችን ችላ ካልዎት፣ ከባድ የስራ ፍሰት ማነቆዎችን ያጋልጣሉ። ይህ ጽሑፍ በመካከላቸው ያለውን መሠረታዊ መዋቅራዊ ግንኙነት ያሳያል imidazole እና ኒኬል. ከንድፈ ሃሳባዊ ዘዴዎች በቀጥታ ወደ ተግባራዊ የሬንጅ መምረጫ መስፈርቶች እንሸጋገራለን። His-tag elution ፕሮቶኮሎችን ለማመቻቸት በማስረጃ ላይ የተመሰረተ ማዕቀፍ ያገኛሉ። እንዲሁም የተለመዱ የመንጻት ውድቀቶችን እንዴት በትክክል መፍታት እንደሚቻል እንሸፍናለን። ይህን አስፈላጊ ኬሚስትሪ መረዳቱ ሊተነብዩ የማይችሉ የሙከራ ውጤቶችን ወደ ከፍተኛ መጠን ወደሚሰሉ አስተማማኝ የታችኛው ተፋሰስ ሂደቶች ይለውጣል።

ቁልፍ መቀበያዎች

• መዋቅራዊ ሚሚሪ፡- ኢሚዳዞል የሂስቲዲን መለያዎችን ያሸንፋል ምክንያቱም ባለ አምስት አባላት ያሉት የቀለበት አወቃቀሩ እንደ የተጠናከረ የሉዊስ መሰረት ሆኖ በኒኬል ማስተባበሪያ ቦታዎች ላይ የታለመውን ፕሮቲን በቀጥታ ስለሚያፈናቅል ነው።

• የሬዚን ምርጫ ጉዳዮች ፡ የኒኬል-ኢሚዳዞል መስተጋብር መረጋጋት በአብዛኛው የተመካው በተጠቀመው የኬልቲንግ ሊጋንድ ላይ ነው (ለምሳሌ፡ 4-dentate NTA ከ 3-dentate IDA በተሻለ የብረት መፍሰስን ይከላከላል)።

• ትኩረትን እንደ መቆጣጠሪያ መደወያ ፡-በማሰር ጊዜ (10-25 ሚ.ሜ) የ imidazole ትክክለኛ ማስተካከያ የፕሮቲን ጣልቃ ገብነትን ያስወግዳል፣ ከፍተኛ መጠን ያለው (200-500 ሚ.ሜ) ዒላማውን እንዲጨምር ያደርጋል።

• ከኬሚስትሪ ባሻገር ፡ እንደ 'የሙሌት ውጤት' (የሬንጅ መጠን ከፕሮቲን ብዛት) ያሉ አካላዊ ሁኔታዎች ከፍተኛ ንፅህናን ለማግኘት እንደ ቋት ኬሚስትሪ ወሳኝ ናቸው።

ሞለኪውላር ሜካኒዝም፡ ሉዊስ አሲዶች፣ መሠረቶች እና መዋቅራዊ ሚሚሪ

ብዙ ጀማሪዎች የኤሌክትሮስታቲክ መስህብ አንቀሳቃሾች አምድ ማሰርን ያስባሉ። ይህ ታዋቂ አፈ ታሪክ ሰፊ የፕሮቶኮል ስህተቶችን ያስከትላል። በፊዚዮሎጂካል ፒኤች, ሂስቲዲን በአብዛኛው ገለልተኛ ሆኖ ይቆያል. ትክክለኛው መስተጋብር ሙሉ በሙሉ የተመካው በተቀናጀ የጋራ ቦንዶች ላይ ነው። ይህንን ሉዊስ አሲድ-ቤዝ ኬሚስትሪ ብለን እንጠራዋለን። በዚህ ሥርዓት ውስጥ የማይንቀሳቀስ ኒኬል እንደ ኤሌክትሮን ተቀባይ ሆኖ ይሠራል። በናይትሮጅን አቶም ላይ ያሉት ብቸኛ ጥንድ ኤሌክትሮኖች እንደ አስፈላጊ ለጋሽ ሆነው ያገለግላሉ። የIMAC ንፅፅርን ለመቆጣጠር ይህንን ion-ያልሆነ ዘዴ መረዳት አለቦት። ስርዓቱን እንደ ቀላል ion-exchange አምድ ከያዙት መንጻትዎ አይሳካም።

መዋቅራዊ ማስመሰል የውድድር ማሰሪያ ዋና መርሆ ነው። ሞለኪውላዊ ጂኦሜትሪውን በደንብ ይመልከቱ። ለኤሌትዩሽን ጥቅም ላይ የሚውለው ተግባራዊ ሞለኪውል ከሂስቲዲን ቀሪዎች ንቁ የጎን ሰንሰለት ጋር ተመሳሳይ ነው። ተመሳሳይ አምስት አባላት ያሉት የቀለበት መዋቅር ይጋራሉ. ይህንን ነፃ ተፎካካሪ ወደ ስርዓቱ ሲያስተዋውቁ ለተመሳሳይ አካላዊ ቦታዎች በንቃት ይዋጋል። የኒኬል አዮን ነፃውን ቀለበት እና መለያ የተሰጠውን ፕሮቲን መለየት አይችልም. ሁለቱም በኤሌክትሮን የሚለግሱ ፊቶችን ለብረት መሃል ያቀርባሉ።

ዘዴው በተወዳዳሪ አስመስሎ መስራት ላይ በእጅጉ ስለሚደገፍ፣ የተሳካ ገለፃ የቁጥር ጨዋታ ይሆናል። በእርስዎ ሙጫ ላይ ቋሚ የኒኬል ማሰሪያ ጣቢያዎች ቁጥር አለዎት። የበርካታ ቅሪቶች አቪዲቲዝም ተጽእኖ ምክንያት የፖሊሂስቲዲን መለያ በጥብቅ ይያያዛል። ነገር ግን ዓምዱን ማጥለቅለቅ የሂሳብ ጥቅሙን ይገለብጣል። ከፍተኛ መጠን ያለው የነፃ imidazole አካባቢን ያጨናንቃል. በቀላሉ በከፍተኛ ሞለኪውላዊ መገኘት መለያውን ያሸንፋል። ይህ የጅምላ መፈናቀል የታለመው ፕሮቲን እንዲለቀቅ እና በአምዱ ውስጥ እንዲፈስ ያስገድዳል.

አስገዳጅ ኬሚስትሪን ወደ ረዚን ምርጫ መስፈርት መተርጎም

የቼሌተር ጂኦሜትሪዎችን መገምገም የመጨረሻውን ምርትዎን በቀጥታ ይነካል። ጠንካራ የድጋፍ ሙጫ የኒኬል አዮንን ደህንነቱ በተጠበቀ ሁኔታ መያዝ አለበት. መደበኛ ናይትሪሎቲሪያሴቲክ አሲድ (ኤንቲኤ) ​​አራት ዋና የማስተባበሪያ ቦታዎችን ይጠቀማል። ይህ tetradentate ዝግጅት ብረቱን ደህንነቱ በተጠበቀ ሁኔታ ይይዛል። ለሂስቲዲን መለያ በትክክል ሁለት የማስተባበሪያ ቦታዎችን ይተዋል. አሮጌው ኢሚኖዲያሴቲክ አሲድ (አይዲኤ) ሶስት የማስተባበሪያ ቦታዎችን ብቻ ይጠቀማል። አይዲኤ ብረቱን የበለጠ በቀላሉ ይይዛል። ኤንቲኤ በጣም በተከማቸ የማብራራት ደረጃዎች ውስጥ የማይፈለግ የኒኬል ማፍሰሻን ይገድባል። የብረት መጨፍጨፍን መቀነስ ለተዛማች ፋርማሲዩቲካል ማምረቻ ወሳኝ ተገዢነት ምክንያት ነው።

ከዚህ በታች የIDA እና NTA ሙጫዎችን መዋቅራዊ ተለዋዋጭነት የሚያነፃፅር ማጠቃለያ ገበታ አለ።

Resin Chelator	ጥቅም ላይ የዋሉ የማስተባበሪያ ጣቢያዎች	ለፕሮቲን ጣቢያዎችን ይክፈቱ	የብረታ ብረት አደጋ
ኢሚኖዲያቲክ አሲድ (IDA)	3 (Tridentate)	3	ከፍተኛ (በተለይ በከፍተኛ የኤሌክትሮማግኔቲክ ሞላሪቲስ)
ኤንቲኤ (ኒትሪሎቲሪያሴቲክ አሲድ)	4 (Tetradentate)	2	ዝቅተኛ (የሽግግር ብረቶች በጥብቅ ያስራል)

ትክክለኛውን የሽግግር ብረት መምረጥ የመነሻ መስመርዎን ልዩነት ይለውጣል. ብረቱን ከተወሰኑ የታችኛው ተፋሰስ ግቦችዎ ጋር ማዛመድ አለብዎት። ኒኬል ለከፍተኛ አቅም የኢንዱስትሪ ደረጃን ይወክላል. አጠቃላይ ዓላማ መያዝን በሚያምር ሁኔታ ያስተናግዳል። ኮባልት በአጠቃላይ ደካማ ትስስር ያቀርባል. ኢላማዎን ከኮባልት ለማምለጥ በጣም ያነሰ የተፎካካሪ ሞለኪውል ያስፈልግዎታል። ሆኖም ኮባልት የጀርባ አስተናጋጅ ፕሮቲኖችን በውጤታማነት ውድቅ በማድረግ እጅግ የላቀ ንፅህናን ያቀርባል። መዳብ ከፍተኛውን የማሰር ጥንካሬ ይሰጣል ነገር ግን ዝቅተኛውን ልዩነት ያቀርባል. እንደ ELISA ሽፋን ላሉ ቀላል የማበልጸጊያ ተግባራት መዳብን መያዝ አለቦት።

ብረት ion	አስገዳጅ ትስስር	ልዩነት	ምርጥ የአጠቃቀም መያዣ
ኒኬል (Ni2+)	ከፍተኛ	መጠነኛ	መደበኛ የፕሮቲን ምርት እና ከፍተኛ ምርት መያዝ.
ኮባልት (ኮ2+)	መጠነኛ	ከፍተኛ	ዝቅተኛ የጀርባ ጫጫታ የሚጠይቁ ከፍተኛ ንፅህና መተግበሪያዎች።
መዳብ (Cu2+)	በጣም ከፍተኛ	ዝቅተኛ	ቀላል ተጎታች ግምገማዎች እና መሠረታዊ ማበልጸግ።

የድምጽ መለኪያዎችን በተመለከተ የአቅራቢዎች ግልጽነት የእርስዎን ጥብቅ ትኩረት ይፈልጋል። ገዢዎች ብዙውን ጊዜ የአካል እገዳ ዝርዝሮችን ችላ ይላሉ። የንግድ ሙጫዎች ሁልጊዜ ማለት ይቻላል እንደ 50% የውሃ እገዳዎች ይላካሉ። ብዙውን ጊዜ በኤታኖል መከላከያ መፍትሄ ውስጥ ይንሳፈፋሉ. አንድ ሚሊር የተገለጸ 'የአልጋ መጠን' በትክክል ሁለት ሚሊር የአካላዊ ዝቃጭ ፓይፕት ያስፈልግዎታል። ለዚህ ሬሾ መለያ አለመቻል ወዲያውኑ የንድፈ ሃሳባዊ ትስስር አቅምዎን በግማሽ ይቀንሳል። ይህ ስሌት ለግዢ እና ለሂደቱ ምጣኔ ፍፁም ወሳኝ መሆኑን ያረጋግጣል።

የፕሮቶኮል ማመቻቸት፡ የኢሚድዳዞል ግራዲየንት ምህንድስና

በማሰር እና በማጠብ ደረጃዎች ወቅት ትክክለኛ ቁጥጥር ጥሩ ንጽህናን ከታላላቅ ነገሮች ይለያል። በመጀመርያው የመጫኛ ደረጃ ዝቅተኛ መጠን በ10 እና 50 ሚሜ መካከል ማስተዋወቅ አለቦት። ይህ የመሠረት ንብርብር ደካማ አስገዳጅ ቦታዎችን በንቃት ይይዛል. የኢንዶጂን አስተናጋጅ ፕሮቲኖች ብዙውን ጊዜ የተበታተኑ የሂስቲዲን ፕላስተሮችን ይይዛሉ። ቦቪን ሴረም አልቡሚን (BSA) እና ኢሚውኖግሎቡሊንስ ካልተያዙ በተለየ ሁኔታ ይያያዛሉ። ዝቅተኛ የመሠረት ክምችት እንደ ኬሚካዊ አስተላላፊ ሆኖ ይሠራል። እነዚህ ተስፋ አስቆራጭ ቆሻሻዎች ከማትሪክስ ጋር እንዳይጣበቁ በንቃት ይከላከላል።

የማብራሪያው ደረጃ በማጎሪያ ተለዋዋጭነት ውስጥ ትልቅ ለውጥ ይፈልጋል። ውስብስቡን ለመስበር ብዙ ጊዜ ከ200 እስከ 500 ሚሜ ያስፈልግዎታል። ይህ ኃይለኛ ገደብ የአካባቢውን አካባቢ ሙሉ በሙሉ ያጥለቀልቃል. የፖሊሂስቲዲን መለያ በሚሊዮን የሚቆጠሩ ተፎካካሪ ሞለኪውሎች ላይ ያለውን ቁጥጥር ብቻ ማቆየት አይችልም። ይህንን ማጎሪያ እንደ ድንገተኛ እርምጃ ወይም መስመራዊ ቅልመት አድርገው መተግበር ይችላሉ። የእርምጃ ማብራሪያዎች የሾሉ ጫፎችን ይፈጥራሉ ነገር ግን አንዳንድ ጊዜ ቆሻሻዎችን ይጎትቱታል። መስመራዊ ቀስቶች በቅርበት ተዛማጅ የሆኑ መልቲሜሪክ ልዩነቶችን ሲለዩ የተሻለ ከፍተኛ ጥራት ይሰጣሉ።

የኬሚካል ተኳኋኝነት ገደቦች የእርስዎን ቋት አጻጻፍ በእጅጉ ይገዛሉ። አንዳንድ የተለመዱ ተጨማሪዎች ስስ የሆነውን የማስተባበር አካባቢን ሙሉ በሙሉ ያጠፋሉ. ከመጫንዎ በፊት የእርስዎን የሊሲስ ቋቶች በደንብ ኦዲት ማድረግ አለብዎት።

• የሚቀንሱ ወኪሎች ፡ Dithiothreitol (DTT) ከ 5 mM በታች ያድርጉት። ከፍተኛ መጠን ያለው የብረት ion በንቃት ይቀንሳል. ሙጫው ወደ አስቀያሚ ቡናማ ቀለም ሲለወጥ ታያለህ.

• ጠንካራ ቼላተሮች ፡ EDTA ከ1 mM በታች ያቆዩት። EDTA እንደ ሄክሳደንት ቼላተር ሆኖ ይሰራል። ብረቱን በቀጥታ ከኤንቲኤ ማትሪክስ ያራግፋል። ሙጫው ወደ ነጭነት ይለወጣል.

• ቀዳሚ አሚኖች ፡ ከተቻለ ከ Tris ቋት ያስወግዱ። ከፍተኛ ሞላሪቲ ትሪስ ከዒላማዎ ጋር ደካማ በሆነ መልኩ መስተጋብር ይፈጥራል፣ ይህም አጠቃላይ ምርቶችን ይቀንሳል። በምትኩ ሶዲየም ፎስፌት ይጠቀሙ.

የ IMAC አለመሳካቶችን መላ መፈለግ፡ ዳይናሚክስ ሲሰበር

አንዳንድ ጊዜ የታለመው ፕሮቲን ሙሉ በሙሉ መያያዝ አይችልም. በኬሚካላዊ ውድቀቶች እና በስቴሪክ ውድቀቶች መካከል በፍጥነት መለየት አለብዎት. መጀመሪያ ቅደም ተከተልዎን ያረጋግጡ። His-tag በ3-ል የታጠፈ የፕሮቲን እምብርት ውስጥ በጥልቅ ተቀበረ። ማሰሪያዎቹ በቀላሉ ወደ ብረት ሊደርሱ አይችሉም። እንደ እድል ሆኖ፣ IMAC ኬሚስትሪ ለመስራት የታጠፈ ፕሮቲን አያስፈልገውም። ሙሉ በሙሉ ወደ ክልከላ ሁኔታ መቀየር ይችላሉ። 8M ዩሪያ መጨመር ፕሮቲኑን ሙሉ በሙሉ ይከፍታል. ይህ የተቀበረውን መለያ ያጋልጣል, ሙሉ የማሰር አቅምን ወዲያውኑ ይመልሳል.

በእጥበት ደረጃዎች ውስጥ ያለጊዜው ማብራት ከመጠን በላይ ማመቻቸትን ያሳያል። ፕሮቲንዎ ከመጨረሻው ደረጃ በፊት ከታጠበ, የባሳል ትኩረትዎ በጣም ከፍተኛ ሊሆን ይችላል. የተፎካካሪው ሞለኪውል ኢላማህን ያለጊዜው እያፈናቀለ ነው። በአማራጭ፣ የእርስዎን ቋት ፒኤች በጥንቃቄ ያረጋግጡ። ፒኤች ሳያውቅ ከ 7.0 በታች ከወደቀ የወሳኙ አስገዳጅ ተለዋዋጭ ይወድቃል። ዝቅተኛ ፒኤች አስፈላጊ የሆነውን የናይትሮጅን ብቸኛ ጥንድን ያመነጫል። ፕሮቶን ከተሰራ በኋላ እንደ ሉዊስ መሰረት የመስራት ችሎታውን ያጣል. ሁሉንም ጨዎችን ከሟሟ በኋላ ሁልጊዜ ፒኤችዎን ያረጋግጡ።

የሙሌት መርህ የተለመደ የመለጠጥ ተረት ይሰብራል። ተጨማሪ ሬንጅ መጠቀም የተሻለ ውጤትን አያመጣም. እንደ እውነቱ ከሆነ, ከመጠን በላይ ሬንጅ አብዛኛውን ጊዜ አጠቃላይ ንጽሕናን ይቀንሳል. እንደ ቤዝቦል ጓንት ያለ ጠንካራውን የእንቅፋት ክስተት ያስቡ። ነጠላ ጓንት ብዙ ትናንሽ የጎልፍ ኳሶችን በቀላሉ ይይዛል። ሆኖም ግን አንድ ትልቅ ቮሊቦል ብቻ ነው መያዝ የሚችለው። ከመጠን በላይ የሆኑ ፕሮቲኖች በአቅራቢያው የሚገኙትን ተያያዥ ቦታዎችን በአካል ይዘጋሉ. የሚፈለገውን ዝቅተኛውን የአልጋ መጠን በትክክል ማስላት አለብዎት. ማትሪክስ ሆን ብሎ መጨናነቅ ከፍተኛ ግንኙነት ያላቸው ኢላማዎች ደካማ አስገዳጅ የሆኑ ቆሻሻዎችን በአካል እንዲፈናቀሉ ያስገድዳቸዋል።

የድህረ-Elution ሂደት፡ የታች ኢሚዳዞል መወገድ

የተረፈ ብክለት የንግድ ሥራ ዋጋ ከመጀመሪያው የመንጻት ጊዜ በላይ ይዘልቃል። ከፍተኛ የተፎካካሪ ስብስቦች በወሳኝ የታችኛው ተፋሰስ ሙከራዎች ላይ በንቃት ጣልቃ ይገባሉ። ስሱ ክሪስታላይዜሽን ማያ ገጾችን በመደበኛነት ያበላሻሉ። በተጨማሪም የአካባቢያዊ osmolarityን በመለወጥ የሕክምና ቀመሮችን ያወሳስባሉ. በቀላሉ ኢሊየቱን ሳይነኩ መተው አይችሉም። ባዮሎጂያዊ እንቅስቃሴ ለተግባራዊ ምርመራ ሳይበላሽ መቆየቱን ለማረጋገጥ የተለየ የማስወገጃ ደረጃ መንደፍ አለብዎት።

ደረጃውን የጠበቀ የማስወገጃ ዘዴዎችን መገምገም ጊዜን ከማስፋት ጋር ማመጣጠን ይጠይቃል። ፕሮቲን ማውለቅ እና ዲያሊሲስ የእርስዎን ሁለት ዋና አማራጮች ይወክላሉ። ዳያሊሲስ ለአነስተኛ የምርምር ቡድኖች ከፍተኛ ወጪ ቆጣቢ ሆኖ ይቆያል። ፕሮቲኑን በከፊል ሊያልፍ በሚችል ሽፋን ውስጥ ያሸጉታል እና ስርጭቱ ስራውን እንዲሰራ ያድርጉት። ይሁን እንጂ ዲያሊሲስ ብዙ ሰዓታት ይወስዳል. ዓምዶችን ማፅዳት የመጠን ማግለል ክሮማቶግራፊ (SEC) ይጠቀማሉ። ትላልቅ ፕሮቲኖች በባዶ መጠን በፍጥነት ይጓዛሉ. ትናንሽ ሞለኪውሎች በተቦረቦሩ ዶቃዎች ውስጥ ይጠመዳሉ። SEC ለንግድ ማኑፋክቸሪንግ የጊዜ ሰሌዳዎች ፈጣን እና ሊሰፋ የሚችል ግብዓት ያቀርባል።

በጣም ሚስጥራዊነት ላላቸው መተግበሪያዎች፣ ሙሉ ለሙሉ የተለየ ስልት መጠቀም ይችላሉ። ከተፎካካሪ ነፃ የሆነ የማብራሪያ ዘዴ የኬሚካል ውድድርን ሙሉ በሙሉ ያልፋል። በምትኩ አካላዊ አካባቢውን ትቆጣጠራለህ።

1. የመጀመሪያ እጥበት፡- ተያያዥ ያልሆኑ ፍርስራሾችን ለማስወገድ የተጫነውን አምድ በተረጋጋ ፒኤች 8.0 ያፅዱ።

2. መጀመሪያ መጣል ፡ ማጠቢያ ቋቱን ወደ pH 7.4 በመጨመር። ይህ ልዩ ያልሆኑ ግንኙነቶችን ማዳከም ይጀምራል.

3. ጥልቅ እጥበት ፡ ፒኤች ወደ 6.5 የበለጠ ይጥሉት። አስተናጋጅ ፕሮቲኖች በዘፈቀደ ሂስታዲን ቀሪዎች ይገለላሉ እና ሙሉ በሙሉ ይታጠባሉ።

4. የመጨረሻ ኢሉሽን ፡ የኤሌክትሮማግኔቲክ ቋት በፒኤች 5.5 እስከ 6.0 ላይ ይተግብሩ። ይህ የ polyhistidine መለያን ፕሮቶኔት ያደርጋል። መለያው የሉዊስ ቤዝ ንብረቶቹን ያጣል እና ያለምንም ተጨማሪ ተፎካካሪ ሞለኪውሎች በንጽህና ይለቀቃል።

ማጠቃለያ

የIMAC ስኬትን መቆጣጠር ስስ የሉዊስ አሲድ-ቤዝ ኬሚስትሪን ማመጣጠን ይጠይቃል። ትክክለኛ የግራዲየንት ቁጥጥር የመጨረሻውን የምርት ጥራትዎን በቀጥታ ይወስናል። ተገቢውን የሬንጅ ጂኦሜትሪ ከተወሰኑ የንጽህና ግቦችዎ ጋር ማዛመድ አለብዎት። የኤሌክትሮስታቲክ ሃይሎች አምድዎን እንደሚቆጣጠሩ በጭራሽ አያስቡ። ሂደቱን እንደ ተወዳዳሪ መዋቅራዊ አስመሳይ እኩልታ ይያዙት። ይህንን ማይክሮ ኤንቬንሽን በትክክል መቆጣጠር ሚዛኑን የጠበቀ መራባት ዋስትና ይሰጣል.

የእርስዎ ተግባራዊ ሊሆኑ የሚችሉ ቀጣይ እርምጃዎች ዛሬ በቤተ ሙከራ ውስጥ ይጀምራሉ። በመጀመሪያ፣ አሁን ያለዎትን የመንፃት ማነቆዎች በቅርበት ይፈትሹ። ከፍተኛ የጀርባ ጫጫታ እያጋጠመዎት ነው? የመታጠቢያ ቋትዎን መጠን ወዲያውኑ እንደገና ይገምግሙ። ጥብቅ መጨናነቅን ለመጠቀም የሚፈለገውን ዝቅተኛውን የአልጋ መጠን መጠቀምዎን ያረጋግጡ። በመጨረሻም፣ የብረታ ብረት ማፍሰስ የእርስዎን የመጠን መጨመር ጥረቶችን የሚጎዳ ከሆነ፣ ማትሪክስዎን ከ IDA ወደ NTA ወዲያውኑ ይቀይሩ።

የሚጠየቁ ጥያቄዎች

ጥ፡ ለምንድነው NaCl (ጨው) ተጠቅሜ ከኢሚድዞል ይልቅ ሂስ የተሰጣቸውን ፕሮቲኖች ለማውጣት የማልችለው?

መ: ጨው ቀላል ionክ ቦንዶችን ያበላሻል። ጨው የምንጠቀመው በዋነኛነት በአዮን ልውውጥ ክሮሞግራፊ ነው። አይኤምኤክ ሙሉ በሙሉ የተመካው በሉዊስ አሲድ-ቤዝ ኬሚስትሪ በኩል በማስተባበር የተቀናጁ ቦንዶች ነው። ከፍተኛ የ NaCl ክምችት እነዚህን የተረጋጋ የተቀናጁ ውስብስቦች በትክክል መስበር አይችልም። ለተወሰኑ የብረት ማሰሪያ ቦታዎች ለመወዳደር መዋቅራዊ አስመሳይ ያስፈልግዎታል።

ጥ፡ ለምንድነው የኔን ፕሮቲን ለማውጣት ከፍተኛ ትኩረት ያለው የኒኬል መፍትሄ ብቻ መጠቀም የማልችለው?

መ፡ ነፃ Ni2+ ions በእርስዎ elation ቋት ውስጥ አዎንታዊ ክፍያ ይይዛሉ። በእርስዎ ሙጫ ላይ የሚኖረው የማይንቀሳቀስ ኒኬል እንዲሁ አዎንታዊ ክፍያን ይይዛል። ቋሚ ማትሪክስ የነፃ ionዎችን በኃይል ይገታል. ነፃው ብረት በቀላሉ የዒላማዎን ፕሮቲን ሳያስወግድ በቀጥታ በአምድዎ ውስጥ ይፈስሳል።

ጥ፡ ለማከማቻ/እንደገና ከኒ-ኤንቲኤ ሙጫ እንዴት ኢሚዳዞልን ማስወገድ እችላለሁ?

መ: የተፎካካሪው ሞለኪውል ከሄክሳሂስቲዲን መለያ ጋር ሲነፃፀር ለኒኬል በአንጻራዊነት ዝቅተኛ ዝምድና ይይዛል። ኃይለኛ የማስወገጃ ወኪሎች አያስፈልጉዎትም። በቀላሉ ዓምዱን በደንብ ከመጠን በላይ በሚሮጥ ቋት ማጠብ በቀላሉ ያፈናቅለዋል። ይህንን እርምጃ በተጣራ ውሃ ይከተሉ, ከዚያም ሙጫውን በ 20% ኢታኖል ውስጥ በጥንቃቄ ያከማቹ.